Images et comptes cellulaires de cochlées intactes et transparentes de gerbille de Mongolie par microscopie confocale à balayage laser

Publication date: September 2017
Source:Annales françaises d'Oto-rhino-laryngologie et de Pathologie Cervico-faciale, Volume 134, Issue 4
Author(s): M. Risoud, J. Sircoglou, G. Dedieu, M. Tardivel, C. Vincent, N.-X. Bonne
ObjectifsRéaliser le protocole de clarification sur des cochlées de gerbilles de Mongolie et évaluer la possibilité de quantifier et d'analyser la cytoarchitecture tri-dimensionelle (3D) de ces cochlées transparisées.Matériels et méthodesLes oreilles internes fraîchement disséquées étaient préparées suivant un protocole de 13jours : fixation, microdissection, post-fixation, décalcification, pré-traitement (amplification du signal, perméabilisation et blocage), marquage fluorescent (immunomarquage indirect et marquage direct), déshydratation, transparisation en solution de Spalteholz (méthyl salicylate et benzoate de benzyl [MSBB]) et montage. L'acquisition des images était réalisée par microscopie confocale à balayage laser. Le logiciel ImageJ était utilisé pour mesurer la longueur analysée de l'organe de Corti analysée et compter les cellules ciliées internes et externes.RésultatsQuatre cochlées ont été imagées. Les reconstructions 3D permettaient l'analyse de grandes longueurs d'organes de Corti. La longueur moyenne d'organe de Corti analysée était de 1269 (±346) μm. Le nombre moyen de cellules ciliées par longueur d'organe de Corti était : 142 (±44) cellules ciliées internes et 400 (±122) cellules ciliées externes.ConclusionLa transparisation cochléaire par le MSBB peut être réalisée chez la gerbille de Mongolie, permettant d'obtenir des images en haute résolution d'oreilles internes marquées en immunofluorescence. Ceci constitue, à notre connaissance, la première application de cette technique dans cette espèce. Elle permet ainsi des comptes cellulaires, sans dissection traumatique, sur de grandes longueurs d'organe de Corti.



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